传说如果喝下耶稣在第一顿晚餐中使用的圣杯中的水，就可以永生。 在一次淘金行动中，发现了记录圣杯的石碑。 圣杯的可能性吸引了大量疯狂的人去寻找。 印第安纳·琼斯博士（哈里森·福特饰）也是其中之一，就连他的父亲老琼斯（肖恩·康纳利饰）也被卷入其中——但他在给琼斯留下圣杯的笔记后就消失了。 踏上威尼斯的土地，琼斯遇见了提前预约的斯奈德博士（艾莉森·杜迪饰）。 他们根据图书馆的线索找到圣盾后，就开始莫名其妙地遭到十字剑兄弟的追杀。 经过一番周折，琼斯终于找到了老琼斯。 与此同时，斯奈德的纳粹身份被曝光，他的笔记被拿走。 圣杯随时可能落入纳粹手中。 于是，琼斯父子开始联手上演一出拯救圣杯的精彩大戏！
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